Source file: (Bacteria) Midiprep.docx

Midi prep (DNA)

Material

1. NucleBond Xtra Midi EF Kit (MN, Cat#. 740420.50)

Method

1. Bacterial stock을 freezing한다. Culture supernatant 500uL와 50% glycerol 500uL를 사용한다.
2. 50mL tube 4개에 cell을 harvest한다. 조건은 4000g, 20min, 4°C이다.
3. Supernatant를 제거한다.
4. Pellet을 RES buffer 8mL에 resuspend한다.
5. Vortex한다.
6. LYS buffer 8mL를 넣는다.
7. Vortex하지 말고 inverting으로 섞는다.
8. RT에서 1min incubation한다.
9. NEU buffer 8mL를 넣는다.
10. Vortex하지 말고 inverting으로 섞는다.
11. Lysate를 50mL conical tube로 옮긴다.
12. 4000g, 5min, 4°C에서 centrifuge한다.
13. Column filter를 15mL EQU buffer로 equilibration한다.
14. Supernatant를 column으로 옮긴다.
15. FIL buffer 5mL를 넣어 1st wash한다.