Source file: (Bacteria) Miniprep.docx

Mini prep (DNA)

Material

1. Qiaprep Spin Miniprep Kit (Qiagen, Cat#. 27106)

Method

1. D-1, single colony를 LB 5mL에 접종해 overnight culture한다.
2. D-0, cell culture 1.5mL를 EP tube로 옮긴다.
3. 13000rpm, 1min, 4°C에서 centrifuge한다.
4. Supernatant를 제거한다.
5. 2-4번 과정을 한 번 더 반복해 총 3mL culture를 harvest한다.
6. Pelleted bacterial cells를 Buffer P1 250uL에 resuspend한다.
7. Buffer P2 250uL를 넣고 tube를 8-10회 inverting해 섞는다.
8. Solution이 blue로 변하는 것을 확인한다.
9. RT에서 3min incubation한다.
10. Buffer N3 350uL를 넣고 tube를 8-10회 inverting해 섞는다.
11. Solution이 colorless로 변하고 blue가 남아 있지 않은지 확인한다.
12. 13000rpm, 20min, 4°C에서 centrifuge한다.
13. Supernatant를 spin column에 apply한다.
14. 13000rpm, 1min, 4°C에서 centrifuge한다.
15. Flow-through를 제거한다.