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SDS-PAGE

Cell sample preparation

1. D-2, cell을 60mm dish에 culture한다.
2. D-0, media를 제거한다.
3. Cold PBS(4°C) 2mL를 넣어 wash한다.
4. PBS를 제거한다.
5. Cold PBS(4°C) 1mL를 넣는다.
6. Scraper를 사용해 cell을 harvest한다.
7. Supernatant를 EP tube로 옮긴다.
8. 1000g, 3min, 4°C에서 centrifuge한다.
9. Supernatant를 제거한다.
10. 보관이 필요하면 이 상태로 -80°C deep freezer에 보관한다.
11. 1X SDS sample buffer 100uL를 넣는다.
12. Heat block에서 105°C, 10min incubation한다.
13. Ice에서 식힌다.
14. 13000rpm, 30min, 4°C에서 centrifuge한다.
15. Supernatant를 새 EP tube로 옮긴다.

Yeast extracellular protein preparation

1. D-2, 14mL round tube에 3mL cell culture를 준비한다.