Transfection using PEI-pro - Lentivirus packaging calculator
Notes
- 4개의 vector의 final molar ratio는 1:1:1:1이고, total DNA 합은 10ug이어야 한다.
- 100mm dish 기준으로 각 DNA가 약 600fmol씩 들어가면 위 조건을 만족한다.
- 각 DNA가 600fmol씩 들어갈 때의 mass는 vector 길이에 따라 달라진다.
- 따라서 최종 total vector mass가 10ug가 되는지 확인한다.
Sheet: 250114 189BBZ
| Tube |
Item |
bp |
필요 질량 (ug) |
주입 부피 (nL) |
| Tube #1 |
LentiCRISPR_sgRNA |
13213 |
=4115.7/1000 |
=16463/1000 |
| Tube #1 |
LentiBone-VSV-G |
5822 |
=1813.5/1000 |
=3627/1000 |
| Tube #1 |
LentiBone-gag-pol |
8895 |
=2770.7/1000 |
=5541/1000 |
| Tube #1 |
LentiBone-Rev |
4174 |
=1300.2/1000 |
=2600/1000 |
| Tube #1 |
Total DNA |
|
=SUM(E7:E10) |
=SUM(F7:F10) |
| Tube #1 |
DMEM |
|
|
=250-F11 |
| Tube #2 |
PEIpro |
|
|
=E11 |
| Tube #2 |
DMEM |
|
|
=250-F13 |
| Plasmid |
Plasmid conc. |
Unit |
| LentiCRISPR_sgRNA |
250 |
ng/uL |
| LB-VSV-G |
500 |
ng/uL |
| LB-gag-pol |
500 |
ng/uL |
| LB-Rev |
500 |
ng/uL |
Sheet: Sheet1
| Tube |
Item |
bp |
0.6pmol (ug) |
0.6pmol (uL) |
X3 plate |
여유분 |
| Tube #1 |
HER2 |
7435 |
3.853 |
=D8/0.5 |
=3*E8 |
=1.1*F8 |
| Tube #1 |
LentiBone-VSV-G |
5822 |
1.896 |
=D9/0.5 |
=3*E9 |
=1.1*F9 |
| Tube #1 |
LentiBone-gag-pol |
8895 |
2.896 |
=D10/0.5 |
=3*E10 |
=1.1*F10 |
| Tube #1 |
LentiBone-Rev |
4174 |
1.357 |
=D11/0.3572 |
=3*E11 |
=1.1*F11 |
| Tube #1 |
Total DNA |
|
=SUM(D8:D11) |
=SUM(E8:E11) |
=3*E12 |
=1.1*F12 |
| Tube #1 |
DMEM |
|
|
=250-E12 |
=3*E13 |
=1.1*F13 |
| Tube #2 |
PEIpro |
|
|
=D12 |
=3*E14 |
=1.1*F14 |
| Tube #2 |
DMEM |
|
|
=250-E14 |
=3*E15 |
=1.1*F15 |
| Plasmid conc. |
Value |
| LB-VSV-G |
0.5 ug/uL |
| LB-gag-pol |
0.5 ug/uL |
| LB-Rev |
0.5 ug/uL |
| LB-189.cys.LRY |
0.5 ug/uL |