Source file: (Bacteria) Transformation.docx

Transformation

Method

1. -80°C에서 competent cell을 꺼내 ice에서 5-10min 해동한다.
2. Competent cell volume의 1/10에 해당하는 vector volume을 넣는다.
3. Tapping 2-3회로 가볍게 섞는다.
4. Ice에서 10min incubation한다.
5. 42°C heat block에서 1min heat shock한다.
6. Ice에서 5min cooling한다.
7. LB media 800uL를 넣는다.
8. 37°C에서 50min recovery incubation한다.
9. 8000rpm, 1min centrifuge한다.
10. Supernatant 800uL를 제거한다.
11. 남은 cell을 pipetting으로 resuspend한다.
12. 해당 cell을 LA-Ab plate에 분주한다.
13. Plate에 spreading한다.
14. 37°C에서 overnight incubation한다.
15. 다음날 colony 생성 여부를 확인한다.
16. LB media, antibiotics 100ng/mL 조건으로 5mL에 4개 colony를 각각 접종한다.
17. 37°C shaking incubator에서 overnight culture한다.